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免疫酶技術(shù)ELISA法是一項(xiàng)先進(jìn)的免疫化學(xué)測定技術(shù),自20世紀(jì)60年中期問世70年代初發(fā)展以來,引起了許多學(xué)者有關(guān)技術(shù)人員的重視。這是因?yàn)槊庖呙讣夹g(shù)有其*的優(yōu)點(diǎn).
免疫酶標(biāo)固相載體方法,根據(jù)固相載體的不同,一般分為三類,即酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系測定。后來又發(fā)展出纖維素薄膜作為載體的ELISA檢測法,俗稱Dot-ELISA.。ELISA和Dot-ELISA的差別主要是所用載體不同,由于纖維素薄膜比聚苯乙烯具有更多的優(yōu)點(diǎn),因此目前Dot-ELISA的使用越來越廣泛。
一,固相載體
任何適用于放射免疫測定的固相載體(也稱為固體相),均可用于免疫酶標(biāo)固相載體的方法中。
免疫酶技術(shù)中使用的固相載體一般分為兩類,一類是具有疏松結(jié)構(gòu)的小球狀物質(zhì),另一類是塑料平板或管。
小球狀物載體
在免疫酶技術(shù)中,使用zui早的疏松的小球狀物載體是微晶纖維素(Micro-crystalline Cellulose),后來逐漸使用瓊脂糖珠(Sepharose 4B),形成*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系。瓊脂糖珠經(jīng)活化后,抗體或抗原蛋白質(zhì)是通過共價鍵與小珠結(jié)合的,結(jié)合方式如下:
通過CNBr共價偶合的抗原或抗體形成的結(jié)合物是穩(wěn)定的,但是在一系列處理過程中,操作復(fù)雜,標(biāo)記酶容易失活,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素較多,加之在測定過程中,分離和清洗懸浮小珠要經(jīng)多次離心,步驟繁瑣,因此實(shí)際應(yīng)用較少。
另外,有人曾將聚丙烯酰胺凝膠(Biogel P-300)和一定孔徑的玻璃珠(Controlled Poreglass)作為固相載體。
也有人用乙酰氯甲酸鹽(Ethylchloroformate)和戊二醛作為聚合劑,使免疫反應(yīng)物相互交聯(lián)而成為固態(tài)。
Kamefusa等發(fā)現(xiàn),硅碎片(Silicon Pieces)作為載體,物理吸附穩(wěn)定,制作簡易且價格低廉。
大多數(shù)小球狀物載體很難適合于免疫酶技術(shù)的大規(guī)模檢測。