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      產(chǎn)品目錄
      HCMEC 人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞
      更新時(shí)間:2020-03-30 點(diǎn)擊量:1706

      HCMEC 人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

      Product Format: a T25 flask

      Culture Properties貼壁

      Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

      Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

      Application:  Cells and cancer research

      NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

       

      Components  

      Item

      Specifications

      a T25 flask

      2X106

      Manual

      1 copy

       

      Operation steps for cell culture

      • 吸走用于培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞;
      • 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;
        (細(xì)胞對于消化比較敏感,消化過度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞*漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
      • 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻;
      • 將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);

      傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

      Cell cryopreservation

      1.凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)

      2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。

      Tips:

      • 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰zhuang死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗次。
      • 細(xì)胞生長不均時(shí),可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
      • 細(xì)胞生長緩慢時(shí),可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(zui高不超過20%),也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài),選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

      不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,所以消化時(shí)間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準(zhǔn),嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。

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      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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