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      呋喃西林代謝物快速檢測試劑盒說明書
      更新時間:2020-04-20 點(diǎn)擊量:2005

      呋喃西林代謝物快速檢測試劑盒說明書
      一、原理
      本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物呋喃西林代謝物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色, 樣本吸光值與其所含殘留物呋喃西林代謝物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物呋喃西林代謝物的含量。
      二、試劑盒特性
      ?試劑盒靈敏度:    0.02ppb
      ?孵育溫度:    25℃
      ?孵育時間:    30min~15min
      ?樣本檢測下限
      組  織    ·······································   0.1ppb
      雞  蛋    ·······································   0.1ppb
      ?交叉反應(yīng)率
      呋喃西林代謝物    100%
      呋喃唑酮代謝物    <0.1%
      呋喃妥因代謝物    <0.1%


      5    底物A 液    7ml    白色帽
      6    底物B 液    7ml    黑色帽
      7    終止液    7ml    黃色帽
      8    20X 濃縮洗滌液    40ml    白色帽
      9    2X 濃縮復(fù)溶液    50ml    透明帽
      10    衍生化試劑    10ml    黑色帽

      四、所用儀器、試劑
      具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋
      微量移液器:單道 20~200µl、單道 100~1000µl、多道 30~300 µl
      試    劑:氫氧化鈉、K2HPO4·3H2O、正己烷、乙酸乙酯、濃 HCl
      五、樣本前處理步驟
      ?樣本處理前須知
      (a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
      (b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈, 必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
      ?樣本前處理需配制
      配液 1 0.1M K HPO 溶液:

      2、 在 70℃水浴鍋中孵育 20min;
      3、 分別加入 5ml 0.1M K2HPO4 溶液,0.4ml 1M NaOH 溶液和 6ml 乙酸乙酯,充分振蕩 30s;
      4、 在室溫下(20-25℃)4000r/min 以上離心 10min
      (如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足   3ml        ,在80      ℃  水浴孵育樣品10min      并重復(fù)離心;或提高轉(zhuǎn)速和延長離心時間重復(fù)離心);
      5、 取出 3ml 的乙酸乙酯到另一個容器中于 50℃氮?dú)?空氣吹干。
      6、 用 2ml 正己烷溶解干燥物,再加入 1ml 樣本復(fù)溶液充分混合 30s;在室溫下 4000r/min 以上離心    10min;去除上層正己烷相(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min,       重復(fù)離心);
      7、 取 50µl 下層用于分析。
      樣本稀釋倍數(shù): 2 倍
      此方法與呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、         呋喃妥因代謝物、氯霉素試劑盒可合一處理。
      六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
      ?測定前應(yīng)須知:
      1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫
      (20~25℃)。
      2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。
      3、 在ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定

      個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
      5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。
      6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4~5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
      7、 顯色:加入底物A 液 50µl/孔,再加入底物 B 液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色 15min。
      8、 測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù)),測定每孔 OD 值。
      七、結(jié)果判定
      結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方
      法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃西林代謝物量成負(fù)相關(guān)。
      1、粗略判定:
      用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3, 樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是: 0ppb 為 2.243;0.02ppb 為 1.816;0.06ppb 為 1.415;
      0.18ppb 為 0.74;0.54ppb 為 0.313;1.62ppb 為 0.155。

      2    4    程序中的要點(diǎn)。

      則樣本 1 的濃度范圍是 0.54ppb~1.62ppb;樣本 2

      呋喃它酮代謝物    <0.1%
      ?樣本回收率
      組  織    95%±25%
      雞  蛋    95%±25%
      三、試劑盒組成

      稱 11.4g K2HPO4·3H2O 加去離子水溶解定溶至 500ml。
      配液 2 1M HCl 溶液:
      取 8.6ml 濃HCl 加去離子水定容至 100ml。配液 3 1M NaOH 溶液:
      稱 4g NaOH 加去離子水定容至 100ml
      配液 4 樣本復(fù)溶液:
      將 2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1:1 稀釋。
      ?樣本處理


      4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
      ?操作步驟:
      1、 從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~
      25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
      2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于 2-8℃。


      的濃度范圍是 0.06ppb~0.18ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實(shí)際濃度。
      2、定量分析
      (1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以di一個標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即
      B


      肌肉組織、雞蛋樣本處理方法

      3、 配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去
      離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份

      百分吸光率(%)=

      ×100%
      B0

      1、 稱取 1±0.05g 的均質(zhì)物,分別加入 4ml 的蒸餾
      水,0.5ml 1M HCl 溶液和 100µl 衍生化試劑, 充分振蕩 2min;

      去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
      4、 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每

      B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
      (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

      以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以呋喃西林代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中, 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實(shí)際濃度。
      若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來索取)
      八、 注意事項(xiàng)
      1、 室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~
      25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
      2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
      3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
      4、 反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。
      5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
      6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
      7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時,表示試劑可能變質(zhì)。
      8、 該試劑盒*反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
      九、儲藏條件和保質(zhì)期
      1、 儲藏條件:試劑盒于 2~8℃保存,不要冷凍。
      2、 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
      提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

        氯霉素檢測試劑盒

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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