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      氯霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
      更新時(shí)間:2020-05-13 點(diǎn)擊量:2068

      氯霉素

      快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

      一、原理

      本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氯霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氯霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。

      二、試劑盒特性

      • 試劑盒靈敏度:   0.02ppb
      • 孵育溫度:       25
      • 孵育時(shí)間:       30min15min
      • 樣本檢測(cè)限

      組織、蜂蜜、牛奶···································· 0.1ppb

      奶粉、蛋類(lèi)、尿樣、飼料··························· 0.15ppb

      • 交叉反應(yīng)率

      氯霉素 ·············································· 100%

      甲砜霉素 ········································· < 0.1%

      氟甲砜霉素 ······································ < 0.1%

      • 樣本回收率

      組織、蛋類(lèi)、奶粉·····························  85%±20%

      蜂蜜、牛奶、飼料·····························  93%±25%

      尿樣··········································  100%±25%

      三、試劑盒組成

      1

      微量測(cè)試孔

      每條8孔,一板12條

      2

      標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

      (1ml/瓶)

      0ppb

      0.02ppb

      0.06ppb

      0.18ppb

      0.54ppb

      1.62ppb

      3

      酶標(biāo)記物

      7ml

      紅色帽

      4

      抗體工作

      7ml

      藍(lán)色帽

      5

      底物A液

      7ml

      白色帽

      6

      底物B液

      7ml

      黑色帽

      7

      終止液

      7ml

      黃色帽

      8

      20X濃縮洗滌液

      40ml

      白色帽

      9

      2X濃縮復(fù)溶液

      50ml

      透明帽

      四、所用儀器、試劑

      具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

      微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

            劑:乙酸乙酯、正己烷

      五、樣本前處理步驟

      • 樣本處理前須知

      a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

      b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

      • 樣本前處理需配制:

      配液1  樣本復(fù)溶液:

      2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按11稀釋。

      • 樣本處理:

      a肌肉組織樣本處理方法

      • 稱(chēng)取均質(zhì)后的新鮮樣本3±0.05g50ml離心管中,加入3ml去離子水后再加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min
      • 取出4ml上層液體在50-60氮?dú)饬髦写蹈桑?/span> 
      • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機(jī)相;
      • 50 µl下層相用于分析。

      樣本稀釋倍數(shù):  0.5 

      此方法無(wú)法檢測(cè)肝臟類(lèi)樣本,處理時(shí)易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,影響檢測(cè)結(jié)果(乳化時(shí)建議處理方法:去除上層有機(jī)相再加入2ml正己烷混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機(jī)相)。

      b)蜂蜜處理方法

      • 稱(chēng)2±0.05 g蜂蜜,放入離心管中,用2ml去離子水溶解;加入6ml乙酸乙酯振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min;
      • 移取3ml上層清澈液到另一離心管中,50-60氮?dú)饬飨赂稍?;?/span>0.5ml樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,混合30s
      • 50 µl用于分析。

      樣本稀釋倍數(shù):  0.5  

      c牛奶、奶粉、蛋類(lèi)樣本處理方法

      • 稱(chēng)取均質(zhì)后的新鮮樣本2±0.05g(或2ml)50ml離心管中,加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min;
      • 取出3ml上層液體在50-60氮?dú)饬髦写蹈桑?/span> 
      • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機(jī)相;
      • 50 µl下層相用于分析。

      樣本稀釋倍數(shù):  1 

      處理時(shí)如無(wú)法取到3ml上層液體,可以重復(fù)離心后再取液,或加入10ml乙酸乙酯后取5ml吹干,稀釋倍數(shù)不變。

      d尿樣、飼料樣本處理方法

      • 稱(chēng)取均質(zhì)后的新鮮樣本1±0.05g(或1ml)50ml離心管中,加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min
      • 取出3ml上層液體在50-60氮?dú)饬髦写蹈桑?/span> 
      • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機(jī)相;
      • 50 µl下層相用于分析。

      樣本稀釋倍數(shù):  2 

      六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

      • 測(cè)定前應(yīng)須知:
      • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
      • 使用之后立即將所有試劑放回28。
      • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
      • 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線(xiàn)照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
      • 操作步驟:
      • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
      • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。
      • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
      • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
      • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加入酶標(biāo)記物50µl/zui 后加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min
      • 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
      • 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
      • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

      七、結(jié)果判定

      結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氯霉素量成負(fù)相關(guān)。

      1、粗略判定:

      用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.143 0.02ppb1.816;0.06ppb1.415;0.18ppb0.74;0.54ppb0.3131.62ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb1.62ppb;樣本2的濃度范圍是0.06ppb0.18ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。

      2、定量分析

      1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以di一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

      百分吸光%)=

      B

      ×100%

      B0

      B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

      B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

      2)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制與計(jì)算

      以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。

      若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎索?。?/span>

      八、 注意事項(xiàng)

      • 室溫低于25或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
      • 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
      • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
      • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
      • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
      • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
      • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
      • 該試劑盒zui 佳反應(yīng)溫度為25,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

      九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

      • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。
      •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

      提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

       

      探針實(shí)驗(yàn)代做報(bào)價(jià)

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