通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過有機(jī)溶劑萃取，必要時(shí)皂化處理，進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（294nm波長(zhǎng)）檢測(cè)分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量測(cè)定樣品中α-生育酚的含量的權(quán)wei而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E的檢測(cè)（包括α、β、γ、δ形式）。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

維生素E（vitamin E），又稱為生育酚（tocophenol；TCP），是一種由各種甲基化的酚類構(gòu)成的有機(jī)化合物，為脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式：4種生育酚，4種生育三烯酚（Tocotrienols），分別有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是維生素E中ju活性，也是常見代表，在食物添加劑的命名上標(biāo)記為E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成，而不能在動(dòng)物中產(chǎn)生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚、蔬菜等中含量豐富，包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預(yù)防自發(fā)流產(chǎn)、增強(qiáng)免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細(xì)胞膜的氧化、清除自由基、預(yù)防冠心病等作用。維生素E缺乏將導(dǎo)致神經(jīng)性疾患，例如脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)（spinocerebellar ataxia）、肌病（myopathies）、貧血等。通過有機(jī)溶劑萃取，必要時(shí)進(jìn)行皂化處理，排除脂類、蛋白和碳水化合物的干擾，進(jìn)而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（294nm波長(zhǎng)）檢測(cè)分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量α-生育酚的含量。

產(chǎn)品內(nèi)容

GENMED處理液（Reagent A）       20毫升

GENMED皂化液（Reagent B）  20毫升

GENMED酸性液（Reagent C）       20毫升

GENMED萃取液（Reagent D）   100毫升

GENMED溶解液（Reagent E）       20毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）    500微升

產(chǎn)品說明書      1份

保存方式

保存GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋；GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品處理和標(biāo)準(zhǔn)液配制的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品處理

DOUNCE勻漿器：用于裂解樣品

恒溫水槽或培養(yǎng)箱：用于樣品反應(yīng)孵育和晾干

高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣品準(zhǔn)備 

1）固態(tài)樣品準(zhǔn)備

• 秤取50毫克待測(cè)固態(tài)樣品  
• 移入到一個(gè)液氮凍存管
• 即刻放進(jìn)液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（快速）碾碎組織成粉末（注意：切莫使樣品凍融）
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A）
• 全部轉(zhuǎn)移到DOUNCE勻漿器
• 用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 全部轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• 再加入500微升GENMED處理液（Reagent A）到含有沉淀顆粒的1.5毫升離心管中
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液合并到上述15毫升錐形離心管中（總量1毫升）
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進(jìn)70℃恒溫水槽孵育30分鐘，其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置于冰槽里冷卻1分鐘
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟21二次
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)40℃干式培養(yǎng)箱晾干
• 加入500微升30℃預(yù)熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻
• 即刻進(jìn)行高效液相色譜分析（注意：如果暫時(shí)保存，建議在4℃不超過48小時(shí)；-20℃不超過3月）

2）液態(tài)樣品準(zhǔn)備

• 移取500微升待測(cè)液態(tài)樣品到1.5毫升離心管
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A） 
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進(jìn)70℃恒溫水槽孵育30分鐘，其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置于冰槽里冷卻1分鐘
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12二次
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)40℃干式培養(yǎng)箱晾干
• 加入500微升30℃預(yù)熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻，避光
• 即刻進(jìn)行高效液相色譜分析（注意：如果暫時(shí)保存，建議在4℃不超過48小時(shí)；-20℃不超過3月）

• 測(cè)定準(zhǔn)備

• 開啟儀器預(yù)熱15分鐘
• 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀（HPLC）參數(shù)

• 使用GENMED流相液（Reagent F）運(yùn)行1次（30毫升），以達(dá)到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

• 標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
• 分別加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5號(hào)管
• 移取100微升GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到1號(hào)管，混勻
• 小心移取100微升1號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到2號(hào)管，混勻
• 小心移取100微升2號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到3號(hào)管，混勻
• 小心移取100微升3號(hào)管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到4號(hào)管，混勻
• 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

四、色譜分析

• 將上述配制的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）和待測(cè)樣品放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱預(yù)熱
• 每次（每個(gè)樣品）注射20微升
• 每次（每個(gè)樣品）運(yùn)行10至20分鐘
• 獲得色譜波峰圖：波峰面積（peak area）或峰值，保存記錄
• 全部運(yùn)行完成，使用適量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色譜柱

五、計(jì)算含量

• 方法一：通過儀器中的軟件進(jìn)行測(cè)算
• 方法二：構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為波峰面積（peak area）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度（微克/毫升），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)α-生育酚濃度（微克/毫升）
• 方法三：公式計(jì)算（選擇單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)液）

樣本α-生育酚濃度（微克/毫升）=【樣本波峰面積（peak area）X標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度】÷對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)α-生育酚濃度的波峰面積

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 本產(chǎn)品可以用于β、γ、δ-生育酚的檢測(cè)
• 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍是0.3至50毫克/升
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜
• 如果樣品中脂類含量高，建議皂化處理
• GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議使用GENMED溶解液（Reagent E）作為陰性對(duì)照或作為基準(zhǔn)線
• 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達(dá)均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時(shí)間偏移等
• 用戶可以使用已知濃度的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）或醋酸生育酚作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)加入到樣品中，然后進(jìn)行萃取，檢測(cè)回收率（recovery）
• α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

• α-生育酚的出峰時(shí)間（retention）以用戶操作時(shí)，使用的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）實(shí)際出峰為準(zhǔn)
• 用戶可以使用熒光檢測(cè)：激發(fā)波長(zhǎng)290nm，散發(fā)波長(zhǎng)330nm
• 本公司提供系列維生素檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

使用承諾

秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

單組份訂購(gòu)信息

編號(hào) 名稱 規(guī)格

GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒 20次

GMS19071.2.1A GENMED處理液（Reagent A）     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液（Reagent B） 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液（Reagent C）      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液（Reagent D） 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液（Reagent E） 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）      10毫升

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