您好,歡迎來到上海研謹生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
氟苯尼考快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氟苯尼考抗體,加入酶標記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氟苯尼考的含量。
二、試劑盒特性
u 孵育溫度: 25℃
u 孵育時間: 30min~15min
蜂蜜、組織········································· 0.1ppb
牛奶················································ 0.2ppb
氟苯尼考· ································· ··· 100%
甲砜霉素 ········································ < 0.1%
氟苯尼考胺 ······································ 11%
氯霉素 ············································ < 0.1%
組 | 織 ······································ | 90%±30% | ||
蜂 | 蜜 ······································ | 90%±30% | ||
牛 | 奶 ······································ | 90%±30% | ||
三、試劑盒組成 |
|
| ||
|
|
|
|
|
1 |
| 微量測試孔 | 每條 8 孔,一板 12 條 | |
|
|
|
|
|
|
| 標準液×6 瓶 | 0ppb | 0.1ppb |
2 |
| 0.2ppb | 0.4ppb | |
| (1ml/瓶) | |||
|
| 0.8ppb | 1.6ppb | |
|
|
| ||
|
|
|
|
|
3 |
| 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
|
|
|
|
|
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
|
|
|
|
5 | 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
|
|
|
|
6 | 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
|
|
|
|
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
|
|
|
|
8 | 20X 濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
|
|
|
|
9 | 2X 濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
|
|
|
|
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器:單道 20~200µl、單道 100~1000µl、
多道 30~300 µl
試 劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本前處理需配制:
配液 1 樣本復(fù)溶液:
將 2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1:1 稀釋。 (1 份濃縮復(fù)溶掖+1 份去離子水)。
配液 2 樣本提取液:
將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻(1 份乙腈+2 份乙酸乙酯)。
(a)組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法
1、稱取均質(zhì)后的樣本 3±0.05g 于 50ml 離心管中,先加入 3ml 去離子水混勻后再加入 6ml 乙酸乙酯,振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min;
2、取出 2ml 上層液體在 50-60℃氮氣流中吹干;
3、加入 2 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 1ml樣本復(fù)溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心5min;去除上層有機相;
4、取 50 µl 下層相用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
(b)蜂蜜處理方法
1、取 2±0.05 g 蜂蜜,放入離心管中,用 4ml 去離子水溶解;加入 4ml 乙酸乙酯振蕩 2min,室溫
4000r/min 以上離心 10min;2、移取 2ml 上層清澈液到另一離心管中,50-60℃
氮氣流下干燥;用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,混合 30s;
3、取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
(c)牛奶樣本處理方法
1、 吸取均質(zhì)后的牛奶樣本 1ml 于 5ml 離心管中,加 入 2ml 樣本提取液(配液 2)振蕩 1min,室溫 4000r/min 以上離心 10min;2、 取出 1ml 上層液體在 50-60℃氮氣流中吹干;
3、加入 1 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 1ml樣本復(fù)溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心5min;去除上層有機相;
4、 取 50 µl 下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 2 倍
六、酶標免疫分析程序:
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。
3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。
4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
1、從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放
入自封袋,保存于 2-8℃。
3、配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
4、編號:將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標準品做 2 孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。
6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4~5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
7、顯色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色 15min。
8、測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù)),測定每孔 OD 值。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb
1 的濃度范圍是 0.8ppb~1.6ppb;樣本 2 的濃度范圍是 0.2ppb~0.4ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0 標準)的吸光度值,再乘以 100%,即
B
百分吸光率(%)= ×100%
B0
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標,以氟苯尼考標
準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(索?。?/font>
八、 注意事項
1、室溫低于 25℃或試劑及標本未回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標準的 OD 值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當棄之。標準品 1 的吸光度值小于 0.5 時,表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
1、儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。
2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。