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      SHP-77 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞傳代、復(fù)蘇
      更新時(shí)間:2023-06-16 點(diǎn)擊量:804

      SHP-77 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

      ,SHP77

      貨號(hào):YJ-h349(STR鑒定)

      價(jià)格: 2500.0

      規(guī)格: 1*10 6

      細(xì)胞介紹

      SHP-77 保留了SCLC的重要特征,具有穩(wěn)定的生物化學(xué)特性,可以連續(xù)培養(yǎng)。該細(xì)胞系是小細(xì)胞肺癌中一種不常見(jiàn)的未分化大細(xì)胞突變體。它雖然具有突變體的形態(tài),但保持了經(jīng)典SCLC的生化特性。電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)存在腺體形成和胞漿內(nèi)板層體(intracytoplasmic lamellar bodies)。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物L-多巴脫羧酶和致密核心分泌顆粒(dense core secretory granules)。

      SHP-77可用做檢測(cè)51Cr111In釋放對(duì)體外細(xì)胞及裸鼠體內(nèi)毒性的靶標(biāo),用于評(píng)估肺癌患者的細(xì)胞和血清的免疫反應(yīng)水平。該細(xì)胞可用于評(píng)估接受放射或化學(xué)療法治療的SCLC患者的免疫狀況。經(jīng)本庫(kù)STR檢測(cè)無(wú)誤。

      STR鑒定結(jié)果為:Amelogenin: X,XCSF1PO: 10,11;D13S317: 8,8D16S539: 11,11D5S818: 12,12;D7S820: 11,11;TH01: 7,7;TPOX: 9,11;vWA: 16,16

      細(xì)胞特性

      1 來(lái)源:54歲 男性 肺; 小細(xì)胞肺癌

      2 形態(tài):懸浮和松散貼壁

      3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

      4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

      5 用途:僅供科研使用。

      運(yùn)輸和保存

      干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

      11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

      2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

      細(xì)胞接收后的處理

      1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

      2)請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

      3)半貼細(xì)胞和貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

      4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的。

      一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

      1 準(zhǔn)備RPMI-1640(推薦YJ0002)培養(yǎng)基                87%

      優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                YJ0500             10%

      GlutaMAX-1谷氨酰胺                     ( YJ0900 )               1%

      Sodium Pyruvate丙酮酸鈉              ( YJ01100 )               1%

      P/S青霉素-鏈霉素                     YJ15140-122         1%

      注意: 該細(xì)胞參考傳代周期:4-6,參考換液頻率:每2-3天換1次液,傳代時(shí)可以輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶側(cè)面十余次,將懸浮的細(xì)胞進(jìn)行收集離心,以40萬(wàn)~50萬(wàn)/ mL的密度重懸傳代。輕輕拍打后顯微鏡下觀察仍貼壁未懸浮的細(xì)胞量多的話可以繼續(xù)拍打重復(fù)收集,細(xì)胞量很少的則丟棄,不收集傳代。

      2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

      3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

      二. 細(xì)胞處理:

      1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

      將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

      2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

      SHP-77 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞.png


      該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

      1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

      2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

      3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

      3 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

      下面T25瓶為例;

      1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

      2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

      將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

      注意事項(xiàng)

      1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

      2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

      3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

      4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

      5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有任何技術(shù)問(wèn)題可以聯(lián)系技術(shù)售后服務(wù),我們隨時(shí)給予解答。

       

      2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):


      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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