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      內(nèi)皮型NO合酶(eNOS)ELISA試劑盒實驗原理
      更新時間:2011-11-04 點擊量:778

      內(nèi)皮型NO合酶(eNOSELISA試劑盒實驗原理

      本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中內(nèi)皮NO合酶eNOS含量活性。

      實驗原理:

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中內(nèi)皮型NO合酶(eNOS水平。用純化的eNOS抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮型NO合酶(eNOS,再與HRP標記的eNOS抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮型NO合酶(eNOS呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中內(nèi)皮型NO合酶(eNOS濃度。

       

      試劑盒組成

      試劑盒組成

      48孔配置

      96孔配置

      保存

      說明書

      1

      1

       

      封板膜

      2片(48

      2片(96

       

      密封袋

      1

      1

       

      酶標包被板

      1×48

      1×96

      2-8保存

      標準品:54U/L

      0.5ml×1

      0.5ml×1

      2-8保存

      標準品稀釋液

      1.5ml×1

      1.5ml×1

      2-8保存

      酶標試劑

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      樣品稀釋液

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      顯色劑A

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      顯色劑B

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      終止液

      3ml×1

      6ml×1

      2-8保存

      濃縮洗滌液

      20ml×20倍)×1

      20ml×30倍)×1

      2-8保存

       

      樣本處理及要求

      1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

      2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

      3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

      4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

      5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

      6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融.

      7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      注意事項:

      1.  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

      2.  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

      3.  各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

      4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

      5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.  底物請避光保存。

      7.  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

      8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

      9.  本試劑不同批號組分不得混用。

      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

      試劑盒性能:

      1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上。

      2.批內(nèi)與批間應分別小于9%15%

      保存條件及有效期:

      1.試劑盒保存:2-8

      2.有效期:6個月

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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