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      RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
      更新時(shí)間:2024-06-20 點(diǎn)擊量:216

      RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

      Mouse Monocyte - macrophage Leukemia Cells ,RAW264.7

      貨號(hào):YJ-m047(種屬鑒定)

      價(jià)格: 1350.0

      規(guī)格: 1*106 

      細(xì)胞描述

      此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPSPPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無作用。

      細(xì)胞特性

      1 來源:鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤;單核細(xì)胞;巨噬細(xì)胞

      2 形態(tài):不規(guī)則圓形,紡錘狀,貼壁細(xì)胞,少量懸浮。

      3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

      4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

      5 用途:僅供科研使用。

      運(yùn)輸和保存

      干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

      11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

      2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

      細(xì)胞接收后的處理

      1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

      2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

      3)半貼細(xì)胞或貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

      4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。 

      一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

      1 準(zhǔn)備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %P/S青霉素-鏈霉素 1%。

      2 注意事項(xiàng):

      a)在細(xì)胞生長的初始階段,細(xì)胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有偽足"延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度,會(huì)有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中,鏡下觀察會(huì)發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會(huì)同時(shí)出現(xiàn)。

      b)該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí),用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

      c)該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí),細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起,有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的,在傳代時(shí)應(yīng)收集起來,離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。(d)血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化,應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。

      3 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

      4 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

      二. 細(xì)胞處理:

      1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

      將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

      2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

      該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

      該細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集細(xì)胞后離心去上清,重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)。收貨后第一次傳代1:2進(jìn)行,后續(xù)可以根據(jù)實(shí)際的情況以1:2~1:4的比例進(jìn)行傳代。

      3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

      RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞.png

      下面T25瓶為例;

      1. 1,細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集細(xì)胞。

      2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

      將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

       

      注意事項(xiàng)

      1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

      2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

      3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

      4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

       

      2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

      實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):


      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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