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U251MG/TMZ+luc人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞
Human astroglioma resistant temozolomide cells ,U251 MG/TMZ+luc
貨號:YJ-h244(STR(U251MG鑒定))
價格: 3200.0
規(guī)格: 1*10 6
細胞介紹
該細胞由U251MG/TMZ細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。
細胞特性
1)來源:U251MG/TMZ | 2)形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長 |
3)含量:>1*10 6細胞數(shù) | 4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5)用途:僅供科研使用。 |
細胞運輸、保存及注意事項
復蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細胞照片(100倍,200倍各2張); 2. 若收到的復蘇細胞有少量細胞脫落、飄起,可能由于運輸途中導致。請先于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后,再進行處理; 3. 復蘇細胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基,血清濃度較低,收到細胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基; 4. 建議收到細胞后,首先進行擴增(至少3代),并凍存部分細胞以備用。 5. 細胞傳代或凍存過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。 |
細胞培養(yǎng)試劑的配制
1)TMZ藥物的配制及保存
建議將TMZ藥物配制成16mg/mL的母液:即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ藥物,使其完全溶解。(若所購買的TMZ藥物規(guī)格為10mg,則加入625uL DMSO溶液,待其完全溶解即為16mg/mL母液)
注意:可根據(jù)用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的TMZ,4℃保存1周,-20℃保存1個月,-80℃保存6個月。
2)凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
3)完全培養(yǎng)基的配制(推薦使用YJ-h244-001b)
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
16ug/mL TMZ | 0.1%母液(16mg/mL) |
DMEM培養(yǎng)基 | 補充至所需體積 |
細胞培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細胞處理
1)凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況,2~3day換液。
注意:①細胞復蘇過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞完全貼壁,形態(tài)完全展開,生長狀態(tài)穩(wěn)定后,方可根據(jù)實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態(tài)較為緩慢,可適當降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的TMZ濃度;
②建議復蘇細胞時始終穿戴防護手套和面罩,避免凍存管因溫差較大而發(fā)生爆炸,造成人員傷害。
2)細胞傳代(建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1:2比例傳代)
①待細胞密度達到80%~90%時,即可進行傳代培養(yǎng)。
②棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次,吸凈殘余的PBS。
③加入適當體積的0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶-1mL,其它培養(yǎng)器皿可覆蓋培養(yǎng)底面即可),置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養(yǎng)瓶使細胞全部脫落。迅速拿回操作臺,加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心5min,棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞,輕吹混勻。將細胞懸液按1:1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中,添加6~8mL完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況,2~3day換液。
注意:細胞傳代過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞完全貼壁,形態(tài)完全展開,生長狀態(tài)穩(wěn)定后,方可根據(jù)實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態(tài)較為緩慢,可適當降低TMZ的濃度,或使用不含TMZ的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的TMZ濃度。
3)細胞凍存
①細胞凍存時,步驟同2)細胞傳代的①~④,細胞計數(shù)后,加入配制好的細胞凍存液,重懸細胞,按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
細胞篩選
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染luc的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其luc熒光強度逐漸減弱。若要維持熒光強度,需加入嘌呤霉素進行篩選。
初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/mL嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/mL。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/mL嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
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