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      產(chǎn)品目錄
      DH5α感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書
      更新時(shí)間:2021-03-10 點(diǎn)擊量:2711

       

      DH5α感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書

         DH5α Competent Cell

         目錄號(hào):B0808

       

         保存條件:-80℃保存。

       

         組分說(shuō)明

       

                            Cat. No.                         B0808B

                            Size                             10×100  μl

                            DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                            Control DNA pUC19,0.1    ng/μl      10 μl

       

         產(chǎn)品簡(jiǎn)介

       

          本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA

      的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

      體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選 recA1和endA1的突變

      有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可

      達(dá)108,適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

      本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

      注意事項(xiàng)

       

       1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存,不可反復(fù)凍融和放

          置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

          2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。

          3.包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供對(duì)照試驗(yàn)使用。

       

          操作步驟

       

       1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

      以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

       2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量

          的DNA,通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

       3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

       4.每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

       5.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

       

       注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少,可通過(guò)離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

         2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

         3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

       

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

      ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

      CCK8檢測(cè)

      HE染色

      蛋白相互作用分析

      Western Blot

      免疫組化IHC染色

      熒光定量PCR

      動(dòng)物模型服務(wù)

      流式細(xì)胞檢測(cè)

      免疫熒光染色

      激光共聚焦

      DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

      石蠟/冰凍切片

      透射電鏡服務(wù)

      掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

      蛋白雙向(2-D)

      動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

      免疫共沉淀

      原位雜交(FIsh

      蛋白質(zhì)純化

      分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

      組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

       

      蛋白雙向2D-WB

       

      藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

       

      番紅O固綠染色

      明膠酶譜MMP

      酶活性檢測(cè)

      動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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