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      人膜攻擊復合物(MAC)ELISA試劑盒說明書
      更新時間:2015-08-28 點擊量:712

      人膜攻擊復合物(MAC)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

      試劑盒使用說明書

      本試劑僅供研究使用

      目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)

      液體樣本中膜攻擊復合物(MAC)的含量。

      實驗原理:

      本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人膜攻擊復合物( MAC)水平。用純化的人

      膜攻擊復合物(MAC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膜

      攻擊復合物(MAC),再與 HRP標記的羊抗人抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,

      經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在  HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下

      轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膜攻擊復合物( MAC)呈正相關(guān)。用酶標儀在

      450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人膜攻擊復合物(MAC)含

      量。

      試劑盒組成:

      試劑盒組成

      說明書

      48孔配置

      1

      96孔配置

      1

      保存

      封板膜

      2片(48

      1

      2片(96

      1

      密封袋

      酶標包被板

      標準品:135pg/mL

      標準品稀釋液

      酶標試劑

      1×48

      1×96

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      2-8℃保存

      0.5ml×1

      1.5ml×1

      3 ml×1

      3 ml×1

      3 ml×1

      3 ml×1

      3ml×1

      20ml×20倍)×1

      0.5ml×1

      1.5ml×1

      6 ml×1

      6 ml×1

      6 ml×1

      6 ml×1

      6ml×1

      20ml×30倍)×1

      樣品稀釋液

      顯色劑 A

      顯色劑 B

      終止液

      濃縮洗滌液

      樣本處理及要求:

      1.血清:室溫血液自然凝固  10-20分鐘,離心  20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上

      清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

      2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇   EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合  10-20分鐘后,離心

      20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次

      離心。

      3.尿液:用無菌管收集,離心   20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程

      中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

      1

       



      4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心  20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/

      分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞

      濃度達到 100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心  20

      鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

      5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的  PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/span>

      用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的  PBSPH7.4),用手工或勻漿器

      將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待

      檢測,其余冷凍備用。

      6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上

      進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.

      7.不能檢測含NaN3的樣品,因    NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      操作步驟

      1.

      標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標

      準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二

      孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,

      混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉,再各取  50μl分別加到第五、第六孔

      中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各

      取 50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液  50μl,混

      勻后從第七、第八孔中分別取 50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準

      品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl

      濃度分別為 90 pg/mL,60 pg/mL,30  pg/mL,15 pg/mL,7.5 pg/mL)。

      加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣

      品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣

      品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混

      勻。

      2.

      3.

      4.

      5.

      溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

      配液:將 3048T的  20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 3048T的  20倍)倍稀釋后備用。

      洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此

      重復 5次,拍干。

      6.

      7.

      8.

      9.

      加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

      溫育:操作同 3。

      洗滌:操作同 5。

      顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

      15分鐘.

      10.終止:每孔加終止液   50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

      11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止

      液后 15分鐘以內(nèi)進行。

      注意事項:

      1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡  15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

      用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

      2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

      3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

      控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

      4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD

      2




      大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計

      算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

      5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物請避光保存。

      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

      9.本試劑不同批號組分不得混用。

      10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

      計算:

      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,

      在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的  OD

      值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋

      倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標

      準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD

      代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋

      倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

      (此圖僅供參考)

      試劑盒性能:

      1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù) R值為  0.95以上。

      2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于 9%和  11%

      檢測范圍:

      3 pg/mL -120 pg/mL

      保存條件及有效期:

      1.試劑盒保存:;2-8℃。

      2.有效期:6個月

      3

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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