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      人瘧疾ELISA試劑盒說明書
      更新時(shí)間:2015-08-28 點(diǎn)擊量:570

      人瘧疾酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

      試劑盒使用說明書

      本試劑僅供研究使用

      目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)

      液體樣本中瘧疾。

      實(shí)驗(yàn)原理:

      本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包

      被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中瘧疾相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后

      再與  HRP標(biāo)記的瘧疾抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物

      TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用

      酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),與   CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中瘧疾

      的存在與否。

      操作步驟:

      1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1

      孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

      2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照   50μl。然后在待測樣品孔先

      加樣品稀釋液  40μl,然后再加待測樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不

      觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

      3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

      4.配液:將 3048T的  20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至  600ml后備用

      5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此

      重復(fù) 5次,拍干。

      6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

      7.溫育:操作同 3

      8.洗滌:操作同 5。

      9.顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

      15分鐘

      10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

      11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止

      液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

      結(jié)果判定:

      試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值1.00;陰性對照平均值0.10

      臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

      陰性判定:樣品 OD<臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陰性

      陽性判定:樣品 OD臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陽性

      注意事項(xiàng)

      1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。

      2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

      用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

      3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

      4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      5.底物請避光保存。

      6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為  630nm

      7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須

      注意安全。

      保存條件及有效期

      1.試劑盒保存:;2-8℃。

      2.有效期:6個(gè)月


      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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