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      人臟器組織淋巴細胞分離液KIT說明書
      更新時間:2015-11-12 點擊量:691

      人臟器組織淋巴細胞分離液KIT說明書
      【產(chǎn)品規(guī)格】
      200ml/Kit
      【產(chǎn)品組成】
      為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:


      名稱產(chǎn)品規(guī)格編號
      A組織淋巴細胞分離液
      200ml
      B樣本稀釋液(贈品)2010C1119200ml
      C清洗液(贈品)2010X1118200ml
      DF液(贈品)F2013TBD200ml
      E說明書
      1份

      【實驗前準備】
      A.適用儀器
      zui大離心力可達 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機
      B.耗材

      產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號產(chǎn)地
      15ml離心管散裝339650美國  NUNC
      15ml離心管架裝339651美國  NUNC
      50ml離心管散裝339652美國  NUNC
      50ml離心管架裝339653美國  NUNC
      無菌膠頭滴管或塑料滴管

      【檢驗方法】
      全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
      1.首先制備組織單細胞懸液,制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)"。
      2.取一支15ml離心管,加入與組織單細胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于
      3ml)。
      3.用吸管小心吸取組織單細胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min。(注:
      根據(jù)組織單細胞懸液量確定離心條件,組織單細胞懸液量越大,離心力越大,離心時間
      越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果)。
      4.離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋
      巴細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
      5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞層到另一15ml離心管中,向離心管中加入
      10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
      6.250g,離心 10min。
      7.棄上清。
      8.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
      9. 250g,離心 10min。
      10.重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
      【注意事項】
      1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結(jié)果,zui
      好在取樣 2h內(nèi)進行實驗,樣品存放時間越長,細胞分離效果越差。樣品放置超過6h后
      分離效果更差甚至不能達到分離目的。
      2.本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離
      心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面
      會變成毛面,影響細胞分離效果。
      3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒
      細胞數(shù)量增加。
      4.分離液用量大于組織單細胞懸液樣本時,分離效果更佳。
      5.如實驗后細胞得率或活性過低,請上海研謹生物以獲得和幫助。
      【儲存條件及有效期】
      18-25℃保存,有效期 2年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
      封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
      【參考值(參考范圍)】
      本實驗淋巴細胞提取率及純度大于 80%。
      【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
      1.組織單細胞懸液制備技術(shù)。
      2.所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
      3.所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。
      4.所獲得淋巴細胞的鑒定方法
      A.流式細胞技術(shù)
      B.免疫組化技術(shù)
      C.原位雜交技術(shù)
      D.PCR技術(shù)
      注:上述技術(shù)方案詳情請登陸上海研謹生物科技公司搜索“細胞分離、
      純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊",并在說明書項目欄下下載使用。
      【可能存在的問題及解決方法】
      1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

      出現(xiàn)情況出現(xiàn)原因建議解決方案
      離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
      離心后目的細胞存在于分離液中轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
      離心后白環(huán)層彌散細胞密度過大調(diào)整細胞密度
      離心后白環(huán)層太淺或看不見細胞密度過小調(diào)整細胞密度

      2.本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
      區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離
      心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
      3.本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
      能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
      注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達到分離效果,
      離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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