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      羊臟器組織單核細(xì)胞分離液說明書
      更新時(shí)間:2016-04-20 點(diǎn)擊量:950

      LDS1084YP羊臟器組織單核細(xì)胞分離液說明書

      羊臟器組織單核細(xì)胞分離液說明書
      【產(chǎn)品規(guī)格】
      200ml/Kit
      【產(chǎn)品組成】
      為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

       

      名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      編號(hào)

      A

      羊臟器組織單核細(xì)胞分離液

       

      200ml

      B

      樣本稀釋液(贈(zèng)品)

      2010C1119

      200ml

      C

      清洗液(贈(zèng)品)

      2010X1118

      200ml

      D

      F液(贈(zèng)品)

      F2013TBD

      200ml

      E

      說明書

       

      1
       


      【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
      A.適用儀器
      zui大離心力可達(dá)1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
      B.耗材

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品貨號(hào)

      產(chǎn)地

      15ml離心管散裝

      339650

      美國  NUNC

      15ml離心管架裝

      339651

      美國  NUNC

      50ml離心管散裝

      339652

      美國  NUNC

      50ml離心管架裝

      339653

      美國  NUNC

      無菌膠頭滴管或塑料滴管

       

       

      【檢驗(yàn)方法】
      全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在  20±2的條件下進(jìn)行。
      1.首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)
      2.取一支15ml離心管,加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于
      3ml)。
      3.用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min。(注:
      根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件,組織單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間
      越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
       

      4.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單
      個(gè)核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
      5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向離心管中加
      10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
      6.   250g,離心10min。
      7.棄上清。
      8.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
      9.   250g,離心10min
      10.重復(fù)
      7、8、9,棄上清后以  0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
      【注意事項(xiàng)】
      1.全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui
      好在取樣2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過   6h
      分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
      2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離
      心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
      會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
      3.吸取過多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的
      粒細(xì)胞數(shù)量增加。
      4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。
      5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請(qǐng)上海研謹(jǐn)以尋求幫助。
      【儲(chǔ)存條件及有效期】
      18-25保存,有效期  2年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
      封后置常溫保存。如4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

      【參考值(參考范圍)】
      本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
      下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

      【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

      1.組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
      2.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
      3.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
      4.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
      A.流式細(xì)胞技術(shù)
      B.免疫組化技術(shù)
      C.原位雜交技術(shù)
      D.PCR技術(shù)
      注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸上海研謹(jǐn)生物科技公司搜索細(xì)胞分離、
      純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè),并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
      【可能存在的問題及解決方法】
      1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

      出現(xiàn)情況

      出現(xiàn)原因

      建議解決方案

      離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

      轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短

      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

      離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

      轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

      離心后白環(huán)層彌散

      細(xì)胞密度過大

      調(diào)整細(xì)胞密度

      離心后白環(huán)層太淺或看不見

      細(xì)胞密度過小

      調(diào)整細(xì)胞密度

      2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
      區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離
      心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
      3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
      能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
      注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
      離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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