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      人血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒

      人血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒

      產(chǎn)品型號(hào): VE2011H

      所屬分類:分離液試劑盒

      產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-28

      簡(jiǎn)要描述:本品用于分離人血管內(nèi)皮細(xì)胞
      Store at: RT° C 試劑盒內(nèi)容
      試劑:全血及組織稀釋液 100ml
      試劑:細(xì)胞洗滌液 100ml
      試劑B: 100ml
      試劑C: 100ml
      試劑D: 100ml
      說明書 1份

      詳細(xì)說明:

      人血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒

      Store at:::RT 試劑盒規(guī)格

      試劑盒內(nèi)容:

      全血及組織稀釋液 100ml

      細(xì)胞洗滌液 100ml

      試劑 B 100ml

      試劑 C 100ml

      試劑 D 100ml

      說明書 1

      人血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒

      1. 適用于人或各種動(dòng)物本系列產(chǎn)品檢索

      2. 相關(guān)試劑及耗材

      3. 注意事項(xiàng)

      4. 應(yīng)用

      5. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

      6. 貯藏及保存期限

      7. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

      8. 使用方法說明及圖例

      9. HES-TBD550 使用說明

      10. 組織單細(xì)胞懸液的制備

      11. 生產(chǎn)企業(yè)

      12. 參考文獻(xiàn)

      1. 適用于人或各種動(dòng)物本系列產(chǎn)品檢索::::

      B.... 耗材

      貨號(hào) 名稱及規(guī)格 生產(chǎn)廠商 價(jià)格貨號(hào)                   

        品牌              產(chǎn)品名稱                  規(guī)格                       價(jià)格

      血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒    
      VE2011HTBD4*50ml600
      VE2011RATTBD大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011MTBD小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011RTBD兔血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011DTBD狗血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011BTBD牛血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011GTBD豚鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011CTBD雞血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VEHY2011MTBD猴血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VEHY2011PTBD豬血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VEHY2011HTBD馬血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      VE2011GTBD羊血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒4*50ml600
      2010C1119TBD全血及組織勻漿稀釋液500ml140
      2010X1118TBD細(xì)胞洗滌液500ml140

      3516 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 50 / Costar 686.00

      3513 12 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 50 / Costar 675.00

      3524 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 100 / Costar 1287.00

      3548 48 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 100 / Costar 1542.00

      3599 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 100 / Costar 1367.00

      430168 25CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 20 個(gè)/ Corning 113.00

      430639 25CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 20 個(gè)/ Corning 132.00

      430720 75CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 56.00

      430641 75CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 59.00

      430823 150CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 102.00

      430825 150CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 107.00

      431079 175CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 133.00

      431080 175CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 139.00

      431081 225CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個(gè)/ Corning 167.00

      431082 225CM 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個(gè)/ Corning 176.00

      430790 15ml 離心管(含泡沫架) 50 / Corning 92.00

      430828 50ml 離心管(含泡沫架) 25 / Corning 55.00

      430776 250ml 離心管 102 / Corning 1176.00

      4485 1ml 移液管 50 / Costar 55.00 www.tbdscience.com

      4486 2ml 移液管 50 / Costar 63.00

      4487 5ml 移液管 50 / Costar 92.00

      430659 2ml 凍存管(可立外旋) 50 / Corning 117.00

      430663 5ml 凍存管(可立外旋) 50 / Corning 131.00

      GP2012 玻璃吸管 10 / TBD 30.00

      GT201210 10ml 玻璃離心管 10 / TBD 90.00

      GT201250 50ml 玻璃離心管 5 / TBD 120.00

      L147 100/200 目不銹鋼濾網(wǎng) TBD 150.00

      3. .. 注意事項(xiàng)

      A 本分離液是敏光型的,在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)在 18-25避光保存,啟封后置 4

      ℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,

      影響分離效果。

      B 待分離的樣品要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在 20水浴

      箱中復(fù)溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20℃±2時(shí)分離效果,且所有操作

      過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。

      C 由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響

      分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件

      各實(shí)驗(yàn)室自定)。

      D 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

      E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑

      體積。

       F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細(xì)胞洗滌液及

      紅細(xì)胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、

      低內(nèi)毒素水平且無細(xì)胞毒性,所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。

      4. .. 應(yīng)

      適用于從人或各種動(dòng)物血液中分離內(nèi)皮細(xì)胞。

      5.. . . 產(chǎn)品性能指標(biāo)

      pH 7.0-7.5

      滲透壓 280-340mOsmol/kg www.tbdscience.com

      內(nèi)毒素 0.5...EU/ml

      無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

      澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,,,含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下6.. . . 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

      注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4長(zhǎng)期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

      7. .. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

      A 試劑

      內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒所含試劑、組織勻漿液、胎牛血清

      B 器材

      玻璃離心管、玻璃滴管

      水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)、無菌工作臺(tái)

      8.. . . 使用方法說明及圖例 使用方法說明及圖例

      A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 BCD 三種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

      B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為2×108-1×109個(gè)/ml,具體制備方法參照“二、組織單細(xì)胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

      C. 400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子); 此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為六層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;;;;為富含內(nèi)皮細(xì)胞的 D 液層。。。。第三層;為 C 液層。第四層;為單個(gè)核細(xì)胞層。第五層;為 B 液層。第六層;為紅細(xì)胞層。收集第二層富含內(nèi)皮細(xì)胞的 D 液層放入含 4-5ml 細(xì)胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌 2 次即得所需內(nèi)皮細(xì)胞。 沉淀細(xì)胞

      注::::A. 提取率約為 80%。

      9. HES. . HES-TBD550 使用說明

      HES 是從支鏈淀粉衍生出來的,是富含淀粉的復(fù)合物,其生理和化學(xué)特性主要由羥乙一基

      取代度即取代級(jí)、平均分子量決定。大量實(shí)驗(yàn)表明平均分子量越大對(duì)紅細(xì)胞的凝集作用越強(qiáng),

      有效提高紅細(xì)胞的沉降速度,從而使紅細(xì)胞與其它細(xì)胞分離。故而,使用 HES-TBD550(羥

      乙基淀粉 550)沉淀法是一種高效的細(xì)胞分離方法。 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞分化的多潛能組織干細(xì)胞,是在細(xì)胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細(xì)胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養(yǎng)基的差異以及分離、擴(kuò)增分化過程中操作技術(shù)等多種因素有關(guān)。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細(xì)胞儀法和免疫磁珠法。流式細(xì)胞儀法對(duì)細(xì)胞損傷較大,免疫磁珠法價(jià)格相對(duì)較貴且由于抗原抗體反應(yīng)也容易改變細(xì)胞原有特性,而 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結(jié)合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的純度,目前研究多采用此法。國(guó)內(nèi)不少學(xué)者采用羥乙一基淀粉沉淀紅細(xì)胞,然后再進(jìn)行離心分離單個(gè)核細(xì)胞,也取得不錯(cuò)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)證明采用隨機(jī)數(shù)字表法,將每份臍血隨機(jī)分入兩個(gè)不同處理組,從而將臍血樣本的個(gè)體差異減小到zui小程度。結(jié)果證實(shí),HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細(xì)胞數(shù)量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實(shí)驗(yàn)采用的羥乙一基淀粉商品名為 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550),克分子滲透壓為 308mosmL,膠體滲透壓為 6836 mmHg,可影響紅細(xì)胞集聚性沉降率。紅細(xì)胞集聚是可遞性橋接結(jié)構(gòu)形成的結(jié)果,由大的 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)分子處在紅細(xì)胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)同時(shí)還阻礙白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低,從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經(jīng) HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)處理后,可使紅細(xì)胞沉積至試管底,對(duì)其它主要成分包括干細(xì)胞無影響。經(jīng)這樣處理后,實(shí)驗(yàn)時(shí)間相對(duì)較短(平均為 1.5 h),步驟相對(duì)較少,細(xì)胞污染幾率小,從而使細(xì)胞數(shù)損失減少。結(jié)論證明,與相應(yīng)的干細(xì)胞分離液聯(lián)合分離使用羥乙一基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細(xì)胞分離方法。

      10.. . . 組織單細(xì)胞懸液的制備 組織單細(xì)胞懸液的制備

      注::::A.. .. 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實(shí)驗(yàn)室選取的消化 酶消化法由于各實(shí)驗(yàn)室選取的消化

      酶種類各不相同,,,,請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn) 請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn) 請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn)。。。。

      B. .. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 B. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。。

      剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過濾到試管內(nèi);離心沉淀 1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細(xì)胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時(shí)低速離心除去細(xì)胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過濾去細(xì)胞團(tuán)塊。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為 2×108-1×109個(gè)/ml 的單細(xì)胞懸液備用。 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細(xì)胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細(xì)胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為 2×108-1×109 個(gè)/ml 的單細(xì)胞懸液備用。 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法: 細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板(血球計(jì)數(shù)板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,也可用于對(duì)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。不論計(jì)數(shù)的對(duì)象如何,均須制備分散的細(xì)胞懸液。 計(jì)數(shù)與計(jì)算過程

      1)、在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)的蓋玻片。

      2)、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,至

      蓋玻片被液體充滿為止。

      3)、置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者,

      對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

      4)、按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度:

      細(xì)胞密度=(4 個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4)×104個(gè)/ml×稀釋倍數(shù)

      公式中乘以 104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為:

      1.0mm(長(zhǎng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3 1ml1000mm3

      細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn): 細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn):::

      A 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于 104個(gè)/ml,如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離

      心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到 2 個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)<200 個(gè)/10mm2>500 個(gè)/10 mm2 時(shí),說明稀釋不當(dāng),需重新制備細(xì)胞懸液。

      B 要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好,否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

      C 取樣計(jì)數(shù)前,應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液,尤其是多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混

      勻,以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確;

      D 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞,若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí),只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)

      胞壓在格線上時(shí),則只計(jì)上線,不計(jì)下線,只計(jì)左線,不計(jì)右線。

      E 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計(jì)數(shù)。

      初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤: 初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤:::

      A 計(jì)數(shù)前未將待測(cè)懸液吹打均勻。

      B 滴入細(xì)胞懸液時(shí)蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。

      C 滴入懸液時(shí)的量太多,至使細(xì)胞懸液流入旁邊的槽中。

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