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      人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)實(shí)驗(yàn)原理

      人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)實(shí)驗(yàn)原理

      產(chǎn)品型號(hào): 96T/48T

      所屬分類(lèi):人的ELISA

      產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-13

      簡(jiǎn)要描述:人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)價(jià)格公道、*,售后服務(wù)完整,并提供免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù)!需要產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及其它詳細(xì)信息請(qǐng)直接與我們。

      詳細(xì)說(shuō)明:

      人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)實(shí)驗(yàn)原理

       

      本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)的含量。

      實(shí)驗(yàn)原理:

         本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)水平。用純化的人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB),再與HRP標(biāo)記的嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人嗜環(huán)蛋白親環(huán)素B(CyPB)濃度。

       

      試劑盒組成

      試劑盒組成

      48孔配置

      96孔配置

      保存

      說(shuō)明書(shū)

      1

      1

       

      封板膜

      2片(48

      2片(96

       

      密封袋

      1個(gè)

      1個(gè)

       

      酶標(biāo)包被板

      1×48

      1×96

      2-8保存

      標(biāo)準(zhǔn)品:54ng/ml

      0.5ml×1

      0.5ml×1

      2-8保存

      標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

      1.5ml×1

      1.5ml×1

      2-8保存

      酶標(biāo)試劑

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      樣品稀釋液

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      顯色劑A

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      顯色劑B

      3 ml×1

      6 ml×1

      2-8保存

      終止液

      3ml×1

      6ml×1

      2-8保存

      濃縮洗滌液

      20ml×20倍)×1

      20ml×30倍)×1

      2-8保存

       

      操作步驟:

      1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為36ng/ml,24ng/ml ,12ng/ml6ng/ml,3ng/ml)。

      2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

      3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。

      4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

      5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

      6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

      7.         溫育:操作同3。

      8.         洗滌:操作同5

      9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

      10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

      11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

       

      注意事項(xiàng):

      1.  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

      2.  濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

      3.  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

      4.  請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

      5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.  底物請(qǐng)避光保存。

      7.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

      8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

      9.  本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

      10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

       

      計(jì)算:

      以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),   

      在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD     

      值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋      

      倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)      

      準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

      代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋      

      倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。                  

      試劑盒性能:

      1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

      2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%11%

      檢測(cè)范圍:                                             

      2ng/ml - 50ng/ml      

      保存條件及有效期:

      1.試劑盒保存:2-8

      2.有效期:6個(gè)月



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